購買到原代細胞之后應該注意什么

　　原代細胞是從體內取出后立即培養的細胞。有人將培養的一代細胞和10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。原代細胞直觀的理解就是不能無限繼承。我們建議您使用 P2-P3 代完成實驗，無論您是自己提取細胞還是從試劑公司購買細胞。因此，提取和培養原代細胞并盡可能多地保持良好細胞狀態的技能對實驗的成敗至關重要。那么對已經購買的細胞之后應該注意什么注意事項呢。

　　1. 接收細胞時，在顯微鏡下觀察是否有污垢。在收到細胞前幾天，在各種放大倍數下拍照，在顯微鏡下記錄以防止細胞問題，可以跟公司很好地溝通。

　　2. 收到細胞后不要立即處理。將其放入培養箱中并放置 4 小時或更長時間，然后再操作。如果你不著急，可靜置過夜。

　　3. 細胞一次傳代，需要增加細胞密度才能傳代。原代細胞傳代密度低，難以增殖。建議告訴1：2-1：3。

　　4.原代細胞(內皮細胞、貼壁細胞等)傳代后，0.25%+0.53nM胰蛋白酶處理，1ml消化液37度培養箱30秒，5ml培養基(貼壁細胞正常消化，用量我們用胰蛋白酶和培養基為 1:1，但原代細胞需要用大量培養基中和)。

　　5. 不建議冷凍原代細胞，因為冷凍保存容易導致復活失敗。如果您想凍結，我們建議在 P2 或 P3 代凍結。冷凍溶液中的血清越多越好。推薦比例為 9(血清)：1(DMSO)。

　　6. 待原代細胞復蘇后，將細胞在37-38度水浴中解凍，加入10ml培養基(此比例也可用于復蘇正常貼壁細胞，復蘇存活率顯著提高)，離心重懸鋪板。