介紹下細胞株的保存與操作方法

　　關于有些人總是會遇到養的細胞形狀怎樣都欠好的問題。這個其實是有一個方法可以改善的。下面原代細胞廠家的小編就來介紹下細胞株的保存與操作方法。

　　1、紫外線消毒30分鐘后，關閉紫外線燈管，在正常操作條件下打開超凈臺，用酒精對操作者的手進行消毒。

　　2、確認瓶身干凈后，將必要的培養液和胰酶放在工作臺面上，點燃酒精燈，用酒精棉球擦拭培養液和胰酶瓶口，再將瓶口對準在酒精燈上消毒2-3次。擰開瓶蓋，重新對瓶口和瓶蓋進行消毒，然后將它們放在酒精燈的兩端。特別是將栽培基瓶放在傾斜的架子上，將瓶口對準酒精燈，靠近酒精燈放置，將瓶蓋放在酒精燈的對面。

　　3、用酒精燈對培養瓶的瓶口消毒2-3次，將瓶口和瓶蓋各松開2-3次，將瓶蓋放在酒精燈的右側，掛起來。培養瓶中的培養液進入臟水槽，用酒精燈對瓶口消毒2-3次，直立放好。取 1 ml 移液管，在酒精燈上快速旋轉 1-2 次進行消毒，然后接上移液器吸頭，加入 1.5 ml 胰脂肪酶溶液，轉移至培養瓶中。

　　4. 隔著瓶壁培養細胞層，培養胰脂肪酶約40秒，立即站在光照下檢查細胞和一兩個掉落的細胞之間的孔狀間隙。這是胰脂肪酶的好時機。如果您看到細胞碎片從瓶壁上掉下來，那是由于胰蛋白酶消化過度。如果您沒有看到孔狀裂縫或細胞掉落，則應繼續消化并輕輕平放培養瓶。胰蛋白酶可以使細胞層下沉 1 秒鐘，然后主動勃起檢查細胞在光線下的狀況。這可以重復幾次，直至呈現針孔樣縫隙和1-2個細胞掉落的消化狀況。用移液器將胰酶吸凈。

　　5. 將 1 ml 冷凍保存液放入培養瓶中，并用移液器加入少量培養基。輕輕反復沖洗培養瓶壁 5-8 次，使附著的細胞完全落下。孵育培養基并輕輕移液 2-3 次，以盡可能將細胞保持在單一懸浮液中。

　　6. 將 1 ml 含有細胞的冷凍保存液轉移到新的種子管中并蓋上蓋子以創建實驗符號。

　　7. 將培養瓶口和瓶蓋消毒2-3次，然后擰緊，關閉酒精燈，抬起實驗室工作臺，取出實驗試劑及污缸等，封閉超凈作業臺。

　　8、將種管放入4℃冰箱30分鐘，取出放入-20℃冰箱過夜，-80℃冰箱3-4天。第二天，儲存在-196°C的液氮中。長期儲存。