細胞合成培養基的配制步驟及注意事項

　　雖然各種培養基的成分不同，但制備市售干粉培養基的方法是相似的。大多數合成培養基的生產是標準化和商業化的，市場上有更常用的培養基。自備培養基的方法大多已不再使用，除按需要特殊配制專用培養基外。下面原代細胞廠家的小編就來介紹下細胞合成培養基的配制步驟及注意事項。

　　1.配制用品

　　濾器、微孔濾膜、磁力攪拌器、O2、天平、燒杯、量筒、貯液瓶、瓶塞、注射器、pH計、NaHCO3、培養基、三蒸水、胎牛(小牛)血清、NaOH、 HCI、青霉素、鏈霉素。

　　2.配制步驟

　　①準備干粉介質 將全溶液的2/3用蒸餾水溶解3次，沖洗包裝袋兩次，倒入介質中，加入磁力攪拌器，將其完全置于磁力攪拌器上。攪拌以確保培養物完全溶解的基質干粉。

　　②根據產品包裝說明要求和實驗需要添加LVDS3和谷氨酰胺。

　　③添加抗生素：終濃度為青霉素100U/mL和鏈霉素100ug/mL。(一般市售青霉素80萬單位/瓶。溶于4毫升3蒸餾水，每升培養基加0.5毫升。市售鏈霉素1克/瓶。溶于5毫升。每升加0.5毫升文化。)

　　④加入所需濃度的56℃水浴滅活胎牛血清(或其他)，加蒸餾水3倍至終體積。(目前，所有血清均已滅菌。)

　　⑤調節介質的pH值：一般市售的干粉介質的pH值在溶解后是一個比較穩定的值，但液體配制所用的蒸餾水的3倍，不同濃度的加入等。是幾個因素。由于添加血清或使用 CO2 壓力過濾，制劑的 pH 值可能會發生變化。因此需要強調的是，制備過程中使用新鮮配制的3蒸餾水，加入人血清后調節pH值。過濾和滅菌應采用O2壓濾。常規培養物的 pH 值呈弱堿性，可用 HCl 溶液調節。使用時，將預先配制好的HCl溶液緩慢加入堿性液體中，調節攪拌均勻。pH計或pH準確度試紙將觀察并調整結果以達到pH 7.2-7.4。

　　⑥ 過濾除菌上述溶液。使用的過濾器分別是 0.22um 和 0.45um 的膜，它們定期高壓滅菌。

　　⑦將過濾后的無菌培養液分裝到貼有標簽的無菌液儲存瓶中，塞上，玻璃紙浸泡75%乙醇，4℃保存。

　　3.注意事項

　　①用于配制培養液和培養液的HCl和NaOH溶液的pH值必須用新配制的三蒸水配制，一般在配制當天配制，以保證水的純度和質量。

　　②各種制備培養基的器具需要徹底清洗干燥，以備后用。

　　③一般在配制培養液時不需要加熱輔助溶解。

　　④培養液配制好后，需要進行滅菌試驗，確認培養液沒有被污染。制備培養物所需的血清質量必須穩定，并且應盡可能在同一實驗中使用同一批血清。

　　⑤每批配制的液體量應使用2周左右，以免因時間過長造成營養流失。