淺談細胞傳代的時間問題

　　細胞在培養過程中隨著細胞的不斷增殖和數量的增加，需要進行傳代培養，但由于培養皿/燒瓶空間有限和生長抑制，一些細胞被阻塞。必須轉移到另一個培養皿/燒瓶中。確保有足夠的空間讓細胞生長。但是，對于傳代的時間，很多小伙伴都掌握不好，今天，我們就主要來聊一下，細胞傳代的時間問題。

　　什么時候進行細胞傳代?

　　對于貼壁培養和懸浮培養而言，判斷是否需要傳代主要看以下2個方面：

　　? 細胞密度：

　　如果貼壁培養細胞在對數生長期未達到匯合，則需要傳代。當正常細胞達到匯合時，增殖停止(接觸抑制)，重新接種后恢復需要時間。到達匯合處它可以繼續增長，但通常會在大約兩倍的時間后惡化。同樣，懸浮培養中的細胞需要進入對數生長期，并在未達到匯合時通過。當達到匯合時，懸浮培養中的細胞凝集成團塊，旋轉燒瓶使培養基混濁。

　　? 培養基耗竭：

　　生長培養基 pH 值的降低通常表明乳酸的積累，這是細胞代謝的副產品。乳酸具有細胞毒性，降低 pH 值也是細胞增殖的不利因素。pH 值的變化率通常取決于培養系統中的細胞濃度。細胞濃度越高，培養基消耗得越快。

　　如果 pH 值急劇下降(> 0.1-0.2 pH 單位)且細胞濃度升高，則需要對細胞進行傳代培養。

　　細胞傳代時間安排

　　注意，為保證細胞生物學行為穩定，便于監測其健康狀況，細胞必須嚴格按預定時間傳代。

　　細胞的接種密度應從特定的接種密度逐漸調整，直至達到穩定的生長速度和合適的細胞產量。細胞偏離這種確定的生長模式通常表明細胞的健康狀況不佳(退化、污染等)或者培養體系的某一組分功能異常 (例如：未達到好的溫度，培養基過于陳舊)。

　　保留詳細的細胞培養記錄，記錄飼養和傳代時間、使用的培養基類型、解離方法、接種率、形態觀察、接種濃度、產量和抗生素使用情況。我強烈推薦它。

　　最好根據通過時間安排進行實驗和其他非常規操作(如更換介質類型)。如果實驗的放置與傳統的傳代時間安排不匹配，則有必要確保細胞處于靜止狀態。如果達到停滯期或匯合期，它將停止。它不會在生長過程中通過。