原代細胞的提取方法詳細步驟

　　原代細胞是通過一定的方法如酶法或機械法或生長法使細胞從人體和動物的母體器官、組織或液體中分離出來，并在受控環境條件下分離的細胞在體外或其他人體和動物體內生長。

　　原代細胞的提取方法詳細步驟：

　　1)所有操作，必須在超凈工作臺下進行，通風、清潔，所有設備必須高壓滅菌。

　　2)根據BALB/c小鼠體重，采用3%戊巴比妥鈉10 ml/kg麻醉，將小鼠置于含75%乙醇的燒杯中。這一步不僅可以對鼠標進行消毒，還可以制作全身的毛發。在隨后的剃須過程中，它浸濕了，不會粘在剪刀和紙巾上。

　　3)用鑷子輕輕抬起小鼠心臟，將裝有PBS的注射器插入心尖，同時切開右心耳的小口，慢慢按壓注射器，洗去血液。身體仿佛心臟在跳動。

　　4) 取出小鼠肺組織，關掉肺組織至小米粒大小，然后反復洗滌數次，放入預冷的HBSS中。

　　5) 將小米大小的肺組織放入培養瓶中(培養瓶前一天，用1%的明膠溶液在4°C下過夜，在培養表面涂上培養瓶。處理小鼠前，將培養瓶放回37度培養箱中的溫度)，置于37°培養箱中，消化4小時。

　　6)消化4小時后，加入2倍量的培養基(正常培養基)繼續培養24小時(根據細胞貼壁情況調整培養時間)。

　　7) 24小時后，取出肺組織，在顯微鏡下觀察細胞狀態以換液。

　　8) 原電池的提取和培養是一個非常緩慢的過程。在顯微鏡下通常需要 24 小時才能看到一小群細胞，一兩周后你會看到鵝卵石般的排列。

　　9)為接觸抑制和內皮細胞形成生長單層發生，原電池每2-3天更換一次。因此，它可以傳代并且內皮細胞更接近單層。不要等到內皮細胞變得非常飽滿。