貨號 YJ00012: 外泌體蛋白質組學
一、服務簡介：
外泌體蛋白質組學研究，就是對來自不同外泌體中的蛋白質進行整體水平上的研究，有利于揭示外泌體的功能、篩選藥物靶標以及尋找生物標志物等，在臨床應用上具有重要意義。越來越多的研究表明，一些宿主或腫瘤細胞分泌的外泌體與腫瘤的發生、生長以及轉移等過程密切相關。因此，外泌體蛋白質組學研究在疾病的臨床診斷、療效評價和預后追蹤等方面具有重要作用。
二、服務平臺儀器：
儀器名稱 | 品牌貨號 | 特征 | 功能作用 |
超高速離心機 | 貝克曼Optima XPN | 最大離心力802000g | 超高速離心提取 |
納米粒子分析儀 | 馬爾文NS300 | 粒徑檢測范圍10-2000nm | 粒徑分布和濃度 |
透射電鏡儀 | 賽默飛Tecnai G2 | 觀察微結構 | 拍攝外泌體形態 |
熒光顯微鏡 | 奧林巴斯 | 熒光和白光 | 外泌體細胞示蹤 |
細胞培養箱 | 賽默飛 3111 | CO2培養箱 | 細胞培養 |
腦立體定位注射儀 | 眾實 | 腦立體定位注射外泌體 | 定位注射外泌體 |
小動物活體成像儀 | Cliper IVIS lumina II | 波長范圍：400-900nm | 外泌體活體示蹤 |
動物房 | 國產品牌 | SPF級別 | 動物飼養 |
astral-DIA分析儀器 | Orbitrap Astral | 二級碎片離子定量 | 鑒定外泌體蛋白 |
三、服務流程：
外泌體的分離純化和表征。
利用質譜的技術鑒定外泌體蛋白的組成。
外泌體蛋白質組數據分析。
四、樣本要求：
血清樣本： 5ml，最低2ml （全血10ml)；
血漿樣本： 5ml，最低2ml （全血 8-10ml)；
無血清培養細胞上清：50ml；
其他如尿液、卵泡液、精液、分離好的外泌體、提好的總RNA等的樣本要求請詳詢工作人員。
運輸條件：客戶郵寄標本需使用干冰運輸，請提前跟公司銷售聯系并告知快遞單號。也可聯系公司銷售員去上門取樣品。
五、外泌體蛋白質組學科普知識：
外泌體蛋白質組學的研究離不開對外泌體分離純化、外泌體鑒定、采用的蛋白質組學策略。
外泌體常見的蛋白質組學方法：外泌體的蛋白質組學鑒定基本和常規蛋白質組鑒定方法一致，都是基于（bottom up）自下而上的模式，即首先將蛋白酶解成肽段，然后利用液相色譜串聯質譜技術分析肽段混合物，最后通過數據庫檢索實現蛋白質的鑒定。 基于質譜的的外泌體蛋白質組學可以按照是否有同位素標記非為非標記定量蛋白質組學和穩定的同位素標記的蛋白質組學。
1.非標記定量蛋白質組學技術
非標記定量的蛋白質組學技術研究外泌體可以分為4個步驟：1）分離純化外泌體 2）外泌體的裂解、蛋白提取和溶液酶解3）肽段的預分離和色譜質譜技術分析4）數據分析、蛋白鑒定定量和數據統計。非標記定量的蛋白質組學技術是一種基于肽段圖譜計數的方法，以肽段被質譜檢測到的次數肽段二級圖譜匹配的數目作為定量的依據，在質譜的依賴數據采集的模式下，豐度更高的肽段被質譜選擇進行碎裂的頻率也就越高，基于圖譜技術的非標定量蛋白質組學技術是研究外泌體最廣泛的技術，當然還可以比較不同樣品中蛋白酶解的肽段的色譜峰面積或者質譜離子信號強度進行相對定量，這種方法也常用于外泌體蛋白質組學的研究。
2.穩定同位素標記定量蛋白質組學技術
在EVs的研究中，最常用的穩定的同位素標記技術就是SILAC、iTRAQ、TMT, SILAC技術主要用于培養細胞的外泌體蛋白質組學的分析.
3. DIA定量蛋白質組學
數據非依賴性采集 (Data independent acquisition，DIA)：采用 DIA 模式對每一例實驗樣本進行檢測。 DIA在設置的掃描窗口內全部母離子都可以進入二級碎裂（因此，可重現性高），能夠獲取更多的譜圖信息，最終鑒定的蛋白種類依賴于建庫數據。
DIA的數據采集模式比常規非標定量DDA模式，有更少的缺失值，數據記錄更為完整，重復性大幅度提高；DIA定量方式由一級質譜信號定量升級為由每個肽段通過二級質譜峰面積信號進行定量， 定量信息更為全面，DIA定量準確性更高。
